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植物体内的超氧化歧化酶
超氧化物歧化酶(SOD)植物体内重要的抗性酶,而且是自然界唯一的以氧自由基为底物的酶,可以淬灭超氧负离子O－?2产生H2 O2，减轻O2-。本身及其所产生的其它活性氧(OH-和O2-。)对机体的伤害。因此，SOD活性大小能较好地反映品种的抗逆性强弱。超氧化物歧化酶活性越高，植物的抗旱性越强[14]
了解超氧化物歧化酶测定方法
超氧化物歧化酶测定
超氧化物歧化酶(SOD)的催化底物是O2 ，一般多以一定时间内产物生成量或底物的消耗量作为酶活性单位。由于O2 自身很不稳定，且不易制备，测定SOD的方法除少数采用直接法外，一般多为间接法。 1．直接法 原理是根据O2 或产生O2 的物质本身的性质测定O2 的歧化量，从而确定SOD的活性。经典的直接法包括：脉冲辐射分解法、电子顺磁共振波法(EPR)、核磁共振法。由于所需的仪器设备价格昂贵,一般较少应用。 2．一般化学法 这些方法的共同特点是要有一个O2 的产生体系和一个被O2 还原或氧化的可检测体系。在SOD存在下，一部分O2 被SOD歧化，因而O2 还原或氧化检测体系的反应受到抑制。根据反应受抑制程度，测定SOD的活性。一般化学法有邻苯三酚自氧化法、细胞色素C还原法、羟胺法、黄嘌呤氧化酶-NBT法、肾上腺素法、没食子酸法、6-羟多巴胺法、亚硝酸盐形成法和碱性二甲亚砜法。 常用的有： (1) 邻苯三酚自氧化法：即改良Marklund法。原理是基于经典的分光光度法，在碱性条件下，邻苯三酚自氧化成红桔酚，用紫外-可见光谱跟踪波长为325nm、420nm或650nm(经典为420nm)，同时产生O2 ，SOD催化O2 发生歧化反应从而抑制邻苯三酚的自氧化，样品对邻苯三酚自氧化速率的抑制率，可反映样品中的SOD含量。本法具有特异性强，所需样本量少(仅50μl)，操作快速简单，重复性好，灵敏度高，试剂简单等优点。 (2) 细胞色素C还原法(McCord法)：原理是黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系中产生的O2 使一定量的氧化型细胞色素C还原为还原型细胞色素C，后者在550nm有最大光吸收。在SOD存在时，由于一部分O2 被SOD催化而歧化，O2 还原细胞色素C的反应速度则相应减少，即其反应受到抑制。将抑制反应的百分数与SOD浓度作图可得到抑制曲线，由此计算样品中SOD活性。本法是间接法中的经典方法，但本法灵敏度较低。 3．化学发光法原理是黄嘌呤氧化酶在有氧条件下，催化底物黄嘌呤或次黄嘌呤发生氧化反应生成尿酸，同时产生O2 。后者可与化学发光剂鲁米诺反应，使其产生激发。SOD能清除O2 从而抑制鲁米诺的化学发光。本法可应用于SOD的微量测定，不仅灵敏度高，简便易行，而且特异性与准确性至少与细胞色素C还原法类似。 4．免疫学方法上述方法测定的是SOD活性，免疫学方法则可测定样品中SOD的质量，因此特异性较好，是较理想的测定SOD方法，免疫法有放射免疫法、化学发光免疫分析法、ELISA法等。但其缺陷是只能测定抗体相应的抗原，对于检测不同种类的SOD，则须制备相应的特异性抗体，手续繁琐。 5．电泳法电泳染色定位法的基本原理是根据光化学法与NBT还原法。电泳则采取垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳。既可采用SOD活性正染色(呈现棕色区带)也可采取SOD活性负染色(呈现无色透明区带)。根据凝胶上电泳分离的SOD区带的着色深浅与面积大小，对样品进行半定量分析，也可制作校正曲线计算样品中的SOD含量。染色定位法常用于鉴定SOD，很少为了定量，主要原因是它不及化学法简便，但鉴定SOD却较化学法为优。用电泳法可鉴定SOD是否掺有杂质蛋白，有无同工酶，且可半定量地确定SOD的活性大小。 6........平行放在距20 W荧光灯管3 cm处的光照台上，光照8 min后，立即在200A分光光度计的460 nm波长下比色。用测得的结果计算样品中的SOD含量......[
植物叶片量较少可以测酶活性吗
植物体的库组织中,一般含有较高活性的转化酶。它能将植物体内的主要同化产 物——蔗糖不可逆地水解为葡萄糖和果糖,为细胞的可溶性糖类贮库...
植物中SOD的分离提取及性质研究
从植物材料中提取超氧物歧化酶的方法包括：a．称取植物材料，加入K#-[2]HPO#-[4]溶液，捣碎匀浆，并压榨过滤；b．滤液中加入乙醇∶氯仿混合溶液，搅拌均匀，离心20分钟；c．取上清液加入K#-[2]HPO#-[4]，搅匀，再加入丙酮，离心20分钟；d．取上清液，加入丙酮，离心20分钟；e．弃上清液，沉淀溶于磷酸缓冲液（pH7．5）中，并透析；f．透析液进行胶过滤，收集活性部分。该方法流程简单明了，生产出的产品具有高比活、高纯度、高稳定性。技术资料费380元。 用植物提取超氧化物歧化酶（SOD）的方法其技术方案是将植物的根、茎、叶、种子、果实任选其一，经消毒后，净水浸泡，粉碎成浆体，再用0．5—10倍的保护液提取，然后过滤、除渣，得SOD粗品，将SOD粗品进行精制得营养原液，将粗品与酒液调配得保健液。本发明的优点是：从植物的根茎叶及种子、果实中提取SOD，原料广泛，工艺简单，生产成本低，产品质量安全可靠，适合大批量生产，扩大了使用范围。技术资料费380元。 从玉米籽粒制取超氧化物歧化酶的方法属于生物化学领域中酶的制取方法，涉及从玉米中制取超氧化物歧化酶的方法。其特征是工艺方法为：浸泡玉米；粉碎；上清液超滤浓缩；浓缩液反复浓缩；浓缩液离心除去沉淀物得上清液；上清液超滤脱盐得超氧化物歧化酶。本发明工艺简单，生产周期短，适合于工业化生产，可向医药、食品、日用化妆品等行业提供价格低廉、安全可靠的超氧化物歧化酶产品。技术资料费380元。 由植物沙棘提取分离超氧物歧化酶（SOD）的工艺方法是采用多级离心分离，超滤膜浓缩及凝胶过滤法进行。在该工艺中有机处理溶剂为氯仿－乙醇混合溶剂，加入铵盐使SOD从原液中分离。同时为提高收率采用先进超滤膜分离技术进行浓缩并采用凝胶过滤进行精制。该工艺提取率高，设备投资少，有机溶剂使用量少。此外该技术也适于从其它天然植物中提取分离SOD，不但为SOD制备开辟新途径，也为高效综合利用天然植物SOD提供一种实用可行技术。技术资料费380元。 大豆超氧化物歧化酶生产方法是以大豆（豆类）为原料生产大豆超氧化物歧化酶（大豆SOD），其生产方法是将大豆依次经过：制作膨胀大豆、制取豆浆、调值处理、离心处理得上清液、加热过滤、超滤浓缩、干燥等工序。该方法有原料廉价充足、方法简便、成本较低、适于工厂化大量生产的特点。技术资料费380元。 从海藻中提取铁超氧化物歧化酶(Fe-SOD)的方法由于该方法是从天然材料中提取铁超氧化物歧化酶，海藻原料充足，不存在紧缺现象，同时材料成本相对于提取产品来说也是十分低廉。得到的产品比活相当高，活力损失相对较小，可以满足一般的医药需求，并且符合当代人“崇尚自然，回归自然”的心理需求，不存在转基因生产导致的基因污染问题。工艺中采用了 DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-Sepharose Fast Flow两种层析材料，其特点是流速快、可大量分离样品，同时可反复再生利用，能实现大规模工业化生产。技术资料费380元。 从紫草种子中提取超氧化物歧化酶的方法依次包括如下步骤：将紫草种子废渣、水、氯化铜、氯化锌、氯化钙按比例混合并浸泡24～32小时；提取上清液；热变上清液；用大超滤器过滤上清液得滤液1；在滤液1中加入酶保活剂后用小超滤器过滤；用赛氏过滤器加压过滤，冻干过滤液。其关键是在提取步骤中，加入了触酶活剂及保酶活剂，并且选择了合适的上清液热变温度，使其提取物——超氧化物歧化酶活性高，酶活性为3750单位/毫克，酶比活性1950 单位/毫克蛋白。技术资料费380元。 基因重组人源铜锌超氧化物歧化酶的制备工艺其特征是首先进行工程菌发酵扩增，热激诱导，收集菌体。经缓冲液抽提、再经离子交换、分子筛柱层析分离纯化。本发明具有工艺流程简单、SOD半衰期长、产量高、单位成本低等优点，本产品可广泛应用在化妆品、保健食品、医疗等领域。技术资料费380元。 大规模生产超氧化物歧化酶的新工艺采用冻结的动物血液凝块，磨浆融冻使红血球破裂溶血，在铜盐保护下加热除去变性血红蛋白，粗提液经膜分离除盐和小分子杂蛋白。二次加热除去大部分杂蛋白，冻干，得SOD。比活≥4,000u/mg pro.。技术资料费380元。 从螺旋藻中提取含铁氧化物歧化酶的方法藻体经超声波破碎、硫酸铵分级沉淀、DEAE—23柱层析和Sephadex G—75凝胶过滤提取含铁超氧化物歧化酶，具有工艺简便，Fe—DOS纯化到均一程度，并具有较高的比活。Fe—SOD应用于医药、化妆品、保健品和食品等许多领域。技术资料费380元。
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